Caracterização fisico-químico e atividade antiparasitária da BmatTX-IV, uma fosfolipase A2 básica do veneno de Bothrops mattogrossensis do Paraguai

Abstract

As serpentes da família Viperidae possuem glândulas salivares especializadas produtoras de uma mistura diversificada de proteínas com grande variedade de efeitos farmacológicos. A caracterização dos componentes bioativos destas secreções representam uma ferramenta importante para a melhor compreensão desses efeitos nas diversas manifestações clinicas do envenenamento e potencias aplicações biotecnológicas. Este trabalho tem como objetivo purificar uma fosfolipase básica do veneno de Bothrops mattogrossensis provenientes do Paraguai (BmatTX-IV), realizar sua caracterização físico-química, e avaliar sua atividade antiparasitária contra Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi, assim como seu potencial citotóxico em fibroblastos murinos. A BmatTX-IV foi isolada em alto grau de pureza mediante uma cromatografia de troca catiônica (CM-Sepharose) seguida por uma cromatografia de fase reversa (C18). A análise por espectrometria de massa MALDI-TOF e SDS-PAGE 2D demonstraram uma proteína com valor de m/z de 13.555,82 e pI de 9,3. Posteriormente, mediante sequenciamento, foram obtidos 81 resíduos de aminoácidos apresentando um resíduo de Lisina na posição 49, característico ao grupo das fosfolipases enzimaticamente inativas (Lys49). Adicionalmente, o alinhamento múltiplo de sequência revelou alto grau de similaridade com outras fosfolipases deste grupo. O veneno revelou alta atividade antiparasitária in vitro contra formas promastigotas de Leishmania infantum, assim como contra formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, apresentando inibição superior a 90% nas maiores concentrações testadas. Por outro lado, a BmatTX-IV foi capaz de inibir o crescimento de L. infantum e T. cruzi em aproximadamente 40% na concentração de 100 μg/mL, sugerindo que outras moléculas presentes no veneno podem estar atuando em sinergia com as fosfolipases. Finalmente, foram desenvolvidos testes de citotoxicidade do veneno e da BmatTX-IV contra fibroblastos murinos, o que demonstrou alta citotoxicidade do veneno, enquanto que a BmatTX-IV apresentou 40% nas concentrações de 100 e 50 μg/mL, determinando que nos modelos testados não há seletividade do veneno e da toxina em relação a sua atividade toxica.