Expressão de receptores "toll-like" no músculo gastrocnêmio de camundongos induzida pela peçonha de Bothrops jararacussu e por duas fosfolipases A2 (BthTX-I e BthTX-II) isoladas

Abstract

Os acidentes ofídicos se caracterizam como um grave problema de saúde pública devido a sua alta incidência, afetando principalmente pessoas de baixa renda que vivem em áreas isoladas ou de difícil acesso a unidades de tratamento, podendo ocasionar assim, incapacidade do membro atingido, amputações ou em casos mais graves a morte do indivíduo. No Brasil, as serpentes do gênero Bothrops, são causadoras de 90% dos envenenamentos, sendo a Bothrops jararacussu, uma das que mais se destaca por inocular grandes quantidades de peçonha na sua presa provocando ações miotóxicas, proteolíticas, coagulantes e hemorrágicas. Dados na literatura mostram que as fosfolipases A2 isoladas de toxinas de serpentes do gênero Bothrops estão envolvidas na resposta inflamatória local. No entanto, os mecanismos pelos os quais as toxinas de serpentes desencadeiam esse processo, ainda não foram elucidados. Os receptores Toll-Like (TLRs) são proteínas transmembrana que reconhecem padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs), ou ainda, padrões moleculares associados a danos (DAMPs). Após esse reconhecimento, é ativada uma cascata de sinalização que resulta na produção de citocinas proinflamatórias e consequente resposta imune inata. Dessa forma, a proposta deste trabalho foi estudar a participação de diferentes TLRs durante o processo inflamatório local induzido pela peçonha e duas fosfolipases A2 isoladas da serpente B. jararacussu. Para isso, doses sub-letais de peçonha de B. jararacussu, ou BthTX-I ou BthTX-II foram aplicados por via i.m em modelos murinos. A atividade miotóxica foi avaliada por análise histológica e pela quantificação dos níveis plasmáticos de CKtotal. A produção das citocinas pró-inflamatórias TNF-α e IL-1β foi dosada do tecido muscular e do plasma por método imunoenzimático – ELISA. Foi realizada a quantificação da expressão gênica dos TLRs 2, 4, 5 e 9 nos tecidos pelo método da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RTq-PCR). De acordo com os resultados, pode-se observar que a peçonha e suas toxinas provocaram alterações teciduais caracterizando mionecrose e infiltrado neutrofílico; também induziram a um significativo aumento de CK na corrente sanguínea dos murinos; assim como, levaram a um aumento de TNF-α e IL-1β nos animais testados quando comparados ao controle. Ainda, os resultados apontaram importante aumento na expressão dos TLR2 e TLR4. A participação desses receptores na inflamação provocada pela peçonha de B.jararacussu e suas fosfolipases sugere que os TLRs são importantes alvos para o desenvolvimento de futuras terapias no que diz respeito a inflamação provocada pelos envenenamentos ofídicos ou por fosfolipases A2 miotóxicas.