Caracterização de fosfolipases A2 da peçonha de Bothrops bilineata e identificação do gene de inibidores de fosfolipases A2 de classe gama em Bothrops atrox e Micrurus lemniscatus: um estudo com ênfase no potencial biotecnológico.

Abstract

A Amazônia representa a maior concentração e diversidade de espécies de serpentes do território brasileiro. No entanto, o conhecimento científico, dos componentes de venenos e secreções da maioria destas espécies ainda é desconhecido. Várias moléculas ativas presentes nos venenos de serpentes são alvos de estudo, inclusive para protótipos de novos fármacos. Entre elas estão as fosfolipases A2, uma superfamília de enzimas com atividade na membrana celular e também envolvidas em diversos processos fisiopatológicos no envenenamento. O presente estudo teve como objetivo analisar o potencial biotecnológico relacionado às fosfolipases A2 de três serpentes endêmicas na região amazônica: Bothrops bilineata, Bothrops atrox e Micrurus lemniscatus. A Bothrops bilineata é uma serpente considerada rara, e pouco se conhece cientificamente. Por isso, desperta interesse pela intensa toxicidade que o veneno possui nos casos ofídicos registrados. As alterações miotóxicas ocasionadas por esse veneno foram avaliadas mensurando os níveis séricos de creatina cinase. O veneno da B. bilineata ocasionou mionecrose intensa nos camundongos avaliados. Além disso, apresentou elevada atividade fosfolipásica. Desta forma, a peçonha foi fracionada em uma única etapa cromatográfica (C18 25mm X 4,6mm, 5 μm). Foram identificadas sete frações com massa molecular semelhante à fosfolipases A2 foram obtidas (14 a 18 kDa). A fração BiliTX-7 demonstrou atividade catalítica intensa sobre fosfolipídios (fosfatidilcolina e ácido fosfatídico) e a presença de várias isoformas foram identificadas por eletroforese bidimensional demonstrando possivelmente diferenças de glicosilação. Estudos de inibição de PLA2s e seu contexto fisiopatológico são necessários. Assim, as espécies B. atrox e M. lemniscatus foram utilizadas para a identificação do gene responsável pela produção de inibidores endógenos de fosfolipases A2 (PLIs). O material genético obtido do tecido hepático de cada uma das serpentes foram amplificados, clonados e sequenciado. Os genes de PLIs foram identificados para as duas espécies (At.PLI e MI.PLI ) e alguns parâmetros bioquímicos virtuais foram elucidados. Os dados obtidos servem como base para as proteínas que serão expressas futuramente em sistema de expressão recombinante como forma de continuação do trabalho para aplicação biotecnológica.