CARACTERIZAÇÃO DA ATIVIDADE PLASMODICIDA DE FOSFOLIPASES BÁSICAS DO VENENO DE Bothrops jararacussu

Abstract

A malária é uma doença endêmica em países subdesenvolvidos. A infecção é causada por parasitos do gênero Plasmodium, anualmente, milhares de pessoas são infectadas e, muitas dessas vão ao óbito em decorrência de complicações causadas por esta patologia. Com essas informações, ressalta-se a importância da prospecção de novas biomoléculas que apresentem eficácia para o tratamento desta doença. O objetivo do presente trabalho foi isolar e purificar duas moléculas, sendo elas: BthTX I e II (duas fosfolipases A2 básicas) provenientes do veneno da serpente Bothrops jararacussu. A purificação da PLA2 foi realizada em 2 etapas cromatográficas, sendo a primeira, cromatografia de troca iônica em resina CM-Sepharose, seguida por cromatografia de fase reversa em coluna C-18, na primeira etapa extraiu-se as frações básicas de interesse e estas foram recromatografadas em cromatografia de fase reversa. Na SDS-PAGE, foram observadas moléculas com a massa molecular aparente de 15 kDa, compatível com as fosfolipases A2 de serpentes. A atividade enzimática foi avaliada utilizandose o substrato cromogênico 4N3OBA e demonstrou que a BthTX II é uma fosfolipase A2 enzimaticamente ativa. Em seguida, o potencial antiparasitário das proteínas isoladas foi avaliado in vitro contra formas intraeritrocíticas de Plasmodium falciparum por método de Syber green e ensaio de citotoxicidade contra as células THP-1 e HepG2 pelo método de MTT. Os resultados de inibição antiparasitária frente a P. falciparum das PLA2 não apresentaram inibição na maior concentração testada (IC50>100 μg/mL). Ao avaliar a citotoxicidade frente às linhagens HepG2 e THP-1 observou-se que as moléculas não apresentam citotoxicidade. Os resultados do trabalho, mostram que as metodologias utilizadas para o fracionamento e purificação das moléculas foram eficazes, quanto a atividade biológica, as duas fosfolipases A2 necessitam de uma quantidade acima de (100 μg/mL) para atingirem o (IC50), quando comparado a outros resultados da literatura com moléculas de venenos de serpentes, esta concentração pode ser considerada moderadamente alta. Como conclusão, temos as duas proteínas básicas da fosfolipase A2, BthTX-I e BthTX-II isoladas em elevado grau de pureza, e uma alternativa para melhorar a especificidade da atividade destas moléculas, seria fazer um desenho racional de péptidos provenientes destas fosfolipases A2.