BMAJ-II, uma Fosfolipase A2 Homóloga Básica da Peçonha da serpente Bothrops marajoensis com potencial parasiticida

Abstract

Peçonhas de serpentes contêm várias proteínas que apresentam potencial para serem aplicadas em diversas áreas da saúde e medicina. Uma classe de toxina que vem sendo objeto de estudo, são as fosfolipases A2 (PLA2s), as quais têm importante participação no envenenamento ofídico, estando associadas a diversas respostas tais como processo inflamatório, miotoxicidade, cardiotoxicidade, hemólise e outros que ocorrem em acidentes ofídicos. Além disso, componentes de peçonhas de serpentes, tais como as L-aminoácido oxidases e PLA2s, demonstram potencial antiparasitário, podendo ser úteis para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas nessa área. O presente trabalho teve como objetivo a purificação, caracterização bioquímica e biológica de uma nova PLA2 básica de Bothrops marajoensis com potencial atividade parasiticida. A peçonha foi fracionada aplicando duas etapas cromatográficas iniciando por troca iônica utilizando uma resina CM Sepharose em pH 8,0. A fração de interesse foi selecionada para as etapas seguintes baseada em sua massa molecular e tempo de retenção, e submetida a cromatografia de fase reversa em coluna C18. Realizou-se análise por SDS-PAGE da toxina isolada nomeada Bmaj-II, uma análise eletroforética bidimensional, o sequenciamento parcial de seus aminoácidos, um ensaio de atividade enzimática, uma investigação das estruturas secundárias por dicroísmo circular e ensaios de espalhamento de luz dinâmico. Em seguida, o potencial anti-parasitário da peçonha de B. marajoensis e de Bmaj-II foi avaliado contra promastigotas de Leishmania infantum e epimastigotas de Trypanosoma cruzi in vitro em concentrações de 6,25 a 100 μg/mL, e contra formas intraeritrocíticas de Plasmodium falciparum em concentrações entre 0,09 e 12,5 μg/mL. Posteriormente, a atividade citotóxica sobre células hospedeiras HepG2 foi avaliada. A Bmaj-II mostrou-se homogênea com uma massa molecular confirmada por espectrometria de massa MALDI-TOF2 de 13.956 Da. Apresentou-se um pI de 9,68 indicando compatibilidade de massa e pI de PLA2s de peçonhas de serpentes (svPLA2) básicas. Os resultados dos demais ensaios de caracterização estrutural sugerem a Bmaj-II como PLA2 homóloga Lys49 com uma alta tendência de formar agregações. A toxina isolada demonstrou significativa atividade antiparasitária contra todos os protozoários, contra L. infantum e T. cruzi aproximadamente 30% em concentração de 100 μg/mL, sendo observado também, uma atividade substancialmente maior da peçonha, entre 60-80% em concentração de 100 μg/mL. A atividade da peçonha e da Bmaj-II contra P. falciparum apresentou IC50 de 0,14 ± 0,08 e 6,41 ± 0,64 μg/mL, respectivamente, com valores de CC50 de citotoxicidade contra células HepG2 de 43,64 ± 7,94 e 53,07 μg/mL, respectivamente. Os resultados obtidos mostram o isolamento da Bmaj-II, uma PLA2 Lys49 inédita da peçonha de Bothrops marajoensis além de evidenciar sua atividade microbicida sobre L. infantum, T. cruzi, e P. falciparum. O estudo do seu potencial biotecnológico em relação à leishmaniose, a doença de Chagas e a malária deve ser aprofundado.