Avaliação da expressão gênica comparativa dos genes γGCS, GSH2, TRYR e ODC em isolados de Leishmania de pacientescom Leishmaniose Tegumentar Americana

Abstract

A leishmaniose é uma doença de caráter antropozoonótico presente em regiões tropicais e subtropicais. Cerca de 1,3 milhões de novos casos são notificados anualmente em 98 países, com aproximadamente 30 mil mortes por ano. A Leishmaniose tegumentar (LT) apresenta diversas manifestações clínicas, as mais frequentes são a leishmaniose cutânea e a leishmaniose mucosa, provocadas por espécies do gênero Leishmania, dentre elas Leishmania braziliensis, L. guyanensis e L. amazonensis. O tratamento de LT é feito com antimoniais pentavalentes (SbV), porém nos últimos anos tem aumentado o número de casos de resistência ao tratamento. Os genes yGCS, ODC, GSH2 e TRYR codificam proteínas com funções envolvidas no metabolismo da droga. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a expressão gênica comparativa desses genes em cepas de Leishmania de pacientes atendidos no Hospital de Medicina Tropical de Rondônia – CEMETRON. Foram analisadas 22 cepas de L. braziliensis e 15 de L. guyanensis realizadas em ensaios de PCR em tempo real. Foi obtido o perfil da curva de crescimento das duas espécies analisadas para realizar a coleta de RNA nas fases logarítmica tardia e estacionária. A concentração ideal dos iniciadores para os genes e a eficiência de cDNA foram obtidas para padronização da técnica utilizada. O gene ODC apresentou maior expressão entre os genes avaliados e o gene yGCS apresentou a menor expressão. Entre as espécies de Leishmania foi observada variação significativa nos genes yGCS e ODC. Os genes GSH2 e TRYR não apresentaram variação significativa na expressão em nenhuma das variáveis analisadas. Entre as fases logarítmica tardia e a estacionária (de L.b e L.g) não foi observada diferença significativa. Quando comparada a expressão gênica entre cultura e RNA extraído da lesão foi observada variação significativa para os genes yGCS e ODC. Em todas as análises, inclusive no heatmap foi observada variação na expressão gênica intra espécie. A partir dos resultados obtidos, fica reforçada a importância da obtenção de informações clínicas dos pacientes em relação a cura clínica ou falha terapêutica e visando compará-las com dados de expressão gênica dos isolados e os dados de expressão gênica obtidos do RNA extraídos da lesão.