Efeito de três FLA2s, (BaTX-I, BaTX-II e BaFLA2), isoladas do veneno da serpente Bothrops atrox, sobre a funcionalidade de macrófagos J774A.1 em cultura

Abstract

As fosfolipases A2 (FLA2) são enzimas que catalisam a hidrólise da ligação acil-éster de fosfolipídios de membranas celulares na posição sn-2, liberando ácidos graxos e lisofosfolipídios. Os produtos desta reação podem, subsequentemente, serem utilizados para a síntese de eicosanóides com funções importantes em reações inflamatórias. No presente estudo investigamos os efeitos in vitro de duas miotoxinas básicas, BaTX-I, uma Asp-49 cataliticamente ativa e BaTX-II, uma Lys-49 homóloga inativa, e de uma miotoxina ácida, BaFLA2, também uma Asp-49 ativa cataliticamente, isoladas do veneno da serpente Bothrops atrox, sobre a ativação de macrófagos J774 A.1. Em concentrações não citotóxicas, as três toxinas não afetaram a capacidade de adesão e descolamento dos macrófagos. Apenas a BaTX-II, enzimaticamente inativa, aumentou a fagocitose mediada pelo receptor de complemento. Entretanto, as três toxinas, BaTX-I, BaTX-II e BaFLA2, induziram aumento na produção de ânion superóxido em macrófagos. Somente a BaTX-II aumentou o volume lisossomal dos macrófagos após 15 minutos de incubação. Aos 30 minutos, as três fosfolipases aumentaram este parâmetro, o que não foi observado no período de 60 minutos. Além disso, as três miotoxinas, BaTX-I, BaTX-II e BaFLA2, induziram a formação de corpúsculos lipídicos em macrófagos submetidos e não submetidos á fagocitose. Este resultado pode sugerir a função dos corpúsculos lipídicos como um reservatório de mediadores inflamatórios. Ainda, as toxinas BaTX-I e BaFLA2, foram capazes de aumentar a produção de TNF-α pelos macrófagos no período de 4 horas. A BaTX-II não exerceu este efeito no tempo estudado. Tomados em conjunto, os dados mostraram que, a despeito das diferenças na atividade catalítica, as três toxinas induziram eventos inflamatórios e o caráter ácido ou básico destas enzimas não parece contribuir para estes efeitos.